支原體污染

細(xì)胞實驗是生命科學(xué)研究中重要的工具，它們?yōu)榭茖W(xué)家提供了深入了解細(xì)胞行為、分子機制以及疾病發(fā)展的機會。

細(xì)胞實驗的可靠性和可重復(fù)性是科學(xué)研究的基石。支原體污染是阻礙實驗結(jié)果準(zhǔn)確和可靠的原因之一。支原體是一類細(xì)小的微生物，它們可以感染人類和動物細(xì)胞，對細(xì)胞實驗的結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響，引發(fā)了廣泛的關(guān)注。

本期內(nèi)容，來講講細(xì)胞實驗中，已報道過的支原體危害。

影響細(xì)胞脂類代謝

研究人員以不同濃度的肺炎支原體處理人肺癌上皮細(xì)胞，不同時間后提取胞膜及表面的鞘脂類，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時間質(zhì)譜一 進行分析應(yīng)用RT-PCR和免疫熒光方法，檢測鞘脂類代謝通路中兩個關(guān)鍵酶的變化。

實驗結(jié)果：

肺炎支原體和細(xì)胞大多數(shù)鞘脂類組成成分相同；感染能影響細(xì)胞的鞘脂類代謝，包括誘導(dǎo)新種類的神經(jīng)酞胺的生成， 升高或降低某些神經(jīng)酞胺的濃度，在一定濃度和時間點能誘導(dǎo)酸性鞘磷脂酶的聚簇和絲氨酸棕擱酞轉(zhuǎn)移酶的變化。

對黑色素瘤細(xì)胞的影響

在研究早期傳代黑色素瘤細(xì)胞系中的干細(xì)胞樣特性時，研究人員注意到感染了豬鼻支原體的細(xì)胞系的實驗組的可重復(fù)性差。

研究人員用支原體感染其他黑色素瘤細(xì)胞系.研究發(fā)現(xiàn)，支原體感染在培養(yǎng)中會產(chǎn)生多形性效應(yīng)，從細(xì)胞凋亡到增強的致瘤性和侵襲性，并且會造成相當(dāng)大的資源浪費和實驗結(jié)果解釋的混亂[2]。

誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子

在一項研究中，研究人員利用肺炎支原體感染A549細(xì)胞。

研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體能刺激A549細(xì)胞分泌TNF-α, 其產(chǎn)生水平與刺激時間具有量的正相關(guān)性；肺炎支原體還能刺激A549細(xì)胞分泌IL-8, 其產(chǎn)生水平與刺激時間亦具有量的正相關(guān)性。而被支原體感染的A549細(xì)胞分泌TNF-α和IL-8可能與NF-κB的激活有關(guān)。

誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激

在這項研究中，研究人員利用多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞系(BE-M17)，使用單細(xì)胞凝膠電泳(彗星試驗)，來評估支原體感染對基因組不穩(wěn)定性和堿基切除修復(fù)(BER)活性的影響。

結(jié)果表明，與未感染的細(xì)胞相比，支原體感染在沒有炎癥反應(yīng)的情況下誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，DNA損傷水平(鏈斷裂/堿不穩(wěn)定位點(SB/ALS)和氧化嘌呤)顯著增加。未感染細(xì)胞修復(fù)SB/ALS的速度比感染細(xì)胞更快。未感染的細(xì)胞在24小時內(nèi)就能修復(fù)氧化嘌呤，而感染的細(xì)胞在30小時后也不能修復(fù)。

總之，本研究表明，支原體感染不僅會誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和DNA損傷，而且還會降低負(fù)責(zé)氧化損傷DNA修復(fù)的主要途徑，即BER的效率

[1]郁園園. 肺炎支原體感染干擾人肺癌上皮細(xì)胞A549的脂類代謝[D],2008.

[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010

[3]肺炎支原體誘導(dǎo)A549細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-8的相關(guān)性[J],2009,30(02):188-190+194.

預(yù)防實驗室中的支原體污染

由于支原體感染細(xì)胞，會帶來一系列難以預(yù)測的生理生化反應(yīng)，影響實驗結(jié)果，因此，在日常的實驗中，要注意預(yù)防支原體污染的發(fā)生。

除了常規(guī)的實驗室清潔外，建議使用專業(yè)的支原體清除、預(yù)防試劑——德國Minerva Biolabs公司的支原體祛除噴霧劑：Mycoplasma-off™，水槽支原體預(yù)防試劑：Water Shield™。 

Mycoplasma-off™

Mycoplasma-off™特點：

（1）快速有效

Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑即用型中含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。   

（2）廣譜抗菌

不僅能清除并預(yù)防支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分。

（4）操作簡便

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

Mycoplasma-off™使用方法及步驟：

（1）將Mycoplasma-off™均勻噴于待消毒的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面。

（2）等待5-10分鐘。

（3）用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-off™的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面搽拭干凈。

（4）將已消毒的潔凈臺通風(fēng)2-3分鐘，或?qū)⒁严镜膶嶒炘O(shè)備和器材置于通風(fēng)處2-3分鐘。

（5）將剩余的Mycoplasma-off™噴霧劑置于陰涼通風(fēng)處保存。

Water Shield™

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽，水浴鍋經(jīng)常會有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時，水槽中的水源即會成為細(xì)胞污染的重要來源。

Water Shield™可持續(xù)作用四周，預(yù)防水源中的支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子的污染。

Water Shield™特點：

（1）長效。Water Shield™含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

（2）安全。不含醛類或疊氮化物，對細(xì)胞無毒害。

（3）廣譜。預(yù)防支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子污染。

（4）方便。Water Shield™按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

（5）不產(chǎn)生水垢。

Water Shield™使用方法及步驟：

（1）Water Shield™和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

（2）Water Shield™按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5mlWater Shield™或10L蒸餾水+50mlWater Shield™。

（3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield™。