近年來,qPCR檢測技術(shù),以及環(huán)介導等溫擴增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技術(shù),作為一種新興的核酸擴增方法,在支原體臨床檢測中顯示出了巨大的潛力。
LAMP技術(shù)作為一種等溫擴增技術(shù),與傳統(tǒng)的PCR方法相比,不需要復(fù)雜的溫度循環(huán),只需要穩(wěn)定的恒溫環(huán)境即可實現(xiàn)核酸擴增。這使得LAMP技術(shù)在臨床實驗室和野外條件下都具備廣泛應(yīng)用的可能性。LAMP技術(shù)(環(huán)介導等溫擴增)在支原體檢測中具有一些優(yōu)點和缺點,下面分別進行詳細介紹:
優(yōu)點:
快速擴增: LAMP技術(shù)采用等溫條件,不需要復(fù)雜的溫度循環(huán),因此擴增速度較快,通??梢栽?span>30分鐘到1小時內(nèi)完成,比傳統(tǒng)PCR更迅速。
高特異性: LAMP技術(shù)在引物設(shè)計上采用多個特異性引物,結(jié)合復(fù)雜的擴增動力學,提供了較高的特異性,能夠準確地區(qū)分目標支原體序列。
設(shè)備簡單: LAMP反應(yīng)只需要一個穩(wěn)定的恒溫環(huán)境,例如恒溫水浴或熱擬溫器,不需要復(fù)雜的溫度控制設(shè)備,降低了實驗的技術(shù)和設(shè)備門檻。
結(jié)果可視化: LAMP擴增產(chǎn)物通常形成可肉眼觀察的渾濁沉淀物,有助于直接觀察擴增結(jié)果。此外,可以通過添加熒光染料或指示劑,實現(xiàn)產(chǎn)物的熒光可視化,進一步提高結(jié)果分析的便捷性。
適用于野外應(yīng)用: LAMP技術(shù)在野外環(huán)境中也能夠?qū)嵤驗樗恍枰粋€恒溫環(huán)境,適用于一些需要快速診斷的場景,如偏遠地區(qū)或災(zāi)害現(xiàn)場。
缺點:
復(fù)雜的引物設(shè)計: LAMP技術(shù)需要設(shè)計多個引物,包括外部引物、內(nèi)部引物和環(huán)引物,引物設(shè)計較為復(fù)雜,需要耗費一定的時間和資源。
產(chǎn)物結(jié)構(gòu)復(fù)雜: LAMP擴增產(chǎn)物呈現(xiàn)出高度分支的簇環(huán)結(jié)構(gòu),這種結(jié)構(gòu)可能對產(chǎn)物的純化和后續(xù)分析造成一些挑戰(zhàn)。
不適用于大片段擴增: LAMP技術(shù)相對適用于短片段的核酸擴增,不太適用于較長片段的擴增,這一點與傳統(tǒng)PCR方法不同。
定量困難: LAMP技術(shù)的產(chǎn)物數(shù)量與起始模板數(shù)量之間的線性關(guān)系可能較差,因此在定量方面存在一定的局限性。
部分產(chǎn)物難以區(qū)分: LAMP反應(yīng)產(chǎn)物包括多個簇環(huán)結(jié)構(gòu),其中有些結(jié)構(gòu)可能與非特異性產(chǎn)物難以區(qū)分,可能對結(jié)果解釋帶來困擾。
綜上所述,LAMP技術(shù)在支原體檢測中具有快速、高特異性、設(shè)備要求簡單等優(yōu)點,但也存在引物設(shè)計復(fù)雜、產(chǎn)物結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及部分定量困難等缺點。選擇是否采用LAMP技術(shù)還需綜合考慮具體實驗需求和條件,以及在實際應(yīng)用中的可行性。
因此,綜合考慮,qPCR技術(shù)在支原體檢測的生物醫(yī)藥領(lǐng)域的工業(yè)檢測中,目前還是難以被取代的。