貼壁型的細胞的匯合度約為100%的時候,需進行傳代操作。
當(dāng)細胞以克隆的形式生長時,匯合度則達不到100%。對于該類型的細胞,達到或者接近最大密度的時候,即觀察不到細胞明顯擴增時,就需要進行傳代。
接觸抑制型細胞需要在細胞長滿之前傳代,避免產(chǎn)生細胞長滿后接觸抑制后產(chǎn)生性狀的改變。
懸浮型的細胞必須在細胞達到最大飽和密度之前傳代,懸浮細胞傳代時只需稀釋至合適的密度,讓細胞有充足的營養(yǎng)恢復(fù)到對數(shù)生長期。
如何處理腫瘤細胞株?
了解每株細胞可能產(chǎn)生的生物危害是很難的。
強烈推薦,所有的人類和其他靈長類生物的細胞在預(yù)防HIV和肝炎病毒的實驗條件下操作;
所有的操作必須在生物安全柜中操作,遵守生物安全柜使用規(guī)范;
操作過程中產(chǎn)生的廢液和廢儀器都要經(jīng)過清洗、酸處理等處理后才能丟棄。
WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:
1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
4、血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。
6、對細胞有良好的支持繁殖作用。
我國對牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴格的標(biāo)準(zhǔn)要求:
包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次,滿足干細胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養(yǎng)要求;澳洲血源,完整的檢測報告及滅病毒服務(wù),為各類臨床相關(guān)項目的申報提供完整支持等特點。