支原體是導(dǎo)致體外細(xì)胞污染的重要污染源。用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)或治療性細(xì)胞。產(chǎn)品被支原體污染后，支原體或支原體代謝產(chǎn)物可進(jìn)入人體，并對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害。因此，對(duì)支原體污染的有效檢測(cè)是確保細(xì)胞基質(zhì)及治療性細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量的前提。

支原體傳統(tǒng)檢測(cè)方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法，這兩種均是“藥典方法”。但缺點(diǎn)是耗時(shí)長，靈敏度低。此外，這兩種方法均無法明確所感染支原體的類型。

因此，采用PCR或qPCR檢測(cè)支原體的高度保守序列，用于制藥工業(yè)的放行檢測(cè)，逐漸成為一種趨勢(shì)。當(dāng)然，核酸擴(kuò)增法也存在一定的問題，因?yàn)樗鼨z的不是活的支原體，而是支原體的DNA。另外，它容易受到樣本基質(zhì)中的物質(zhì)干擾，如果靈敏度達(dá)不到，有時(shí)容易漏檢。而培養(yǎng)法的問題是，有些支原體無法在培養(yǎng)基上生長，因此也不會(huì)被發(fā)現(xiàn)。而核酸擴(kuò)增法可以覆蓋100多種支原體，且大大節(jié)省時(shí)間，并且擴(kuò)增產(chǎn)物還可測(cè)序，以終確定污染支原體的物種，增加可追溯性。因此還是值得大力推廣。

現(xiàn)在，市面上有些商品化試劑盒可以挑選，但需要注意它們應(yīng)達(dá)到歐洲藥典或日本藥典標(biāo)準(zhǔn)，例如靈敏度、耐用性和特異性方面，需要經(jīng)過全面驗(yàn)證。下面以德國MB公司的試劑盒（Venor®GeM qEP）為例，對(duì)這類試劑盒略做介紹。

該試劑盒擴(kuò)增柔膜體對(duì)應(yīng)的16S rRNA上的特異序列， 而真核細(xì)胞和其他細(xì)菌DNA不會(huì)被擴(kuò)增。
 
試劑盒可同時(shí)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清篩查以及那些需要遵循歐洲藥典和日本藥典放行檢測(cè)。整個(gè)檢測(cè)小于3小時(shí)。和一些生化和細(xì)胞學(xué)方法相比，PCR具有更高的靈敏度和準(zhǔn)確性。
 
試劑盒包含所有必要的PCR組分，包括引物和探針。其中內(nèi)控DNA可用于鑒定PCR抑制或DNA抽提問題帶來的假陰性。內(nèi)控DNA可直接加到PCR預(yù)混液里，或加到DNA抽提之前的樣本中。它可用于驗(yàn)證DNA抽提和qPCR擴(kuò)增過程。內(nèi)控對(duì)照的擴(kuò)增結(jié)果在560nm檢測(cè)（HEX通道），而支原體的擴(kuò)增在520nm檢測(cè)（FAM通道）。
 
試劑盒包括dUTP，它替代dTTP，方便用尿嘧啶DNA糖基酶（UNG）監(jiān)視假陽性。該試劑盒不包含UNG。

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