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2017弧菌檢測(cè)的進(jìn)展

更新時(shí)間:2019-06-10  |  點(diǎn)擊率:1218

近年來,創(chuàng)傷弧菌造成的感染事件時(shí)常發(fā)生。創(chuàng)傷弧菌已被列為海產(chǎn)品相關(guān)的一種重要病原菌,并已躋入弧菌三大病原菌之一。我國關(guān)于弧菌的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有《GB 4789.7—2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)   食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 創(chuàng)傷弧菌檢驗(yàn)(征求意見稿)》(2017年10月發(fā)布)等。

 

2017年,ISO更新了弧菌的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),即ISO 21872-1-2017 食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué) 潛在腸道致病性弧菌屬檢測(cè)的水平方法 第1部分:副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè)。該標(biāo)準(zhǔn)取代了2007年舊的版本,主要變化是引入了可選擇的弧菌的分子鑒定方法(包括副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌、霍亂弧菌),并在附錄E上增添了方法評(píng)價(jià)。但實(shí)際上,檢測(cè)方法上,ISO和我國標(biāo)準(zhǔn)還有一些不一樣的地方。

 

ISO指出,對(duì)增菌孵育溫度的調(diào)整,可改善食品中弧菌的回收率。例如,在新鮮產(chǎn)品中,增菌時(shí)孵育41.5℃可使副溶血性弧菌和霍亂弧菌的回收率提高。在冷凍食品(-18℃以下)或腌制食品中,創(chuàng)傷弧菌、副溶血性弧菌和霍亂弧菌的增菌溫度在37℃可使回收率提高。因此,在增菌環(huán)節(jié),ISO推薦的增菌液堿鹽蛋白胨水(ASPW)的孵育溫度為41.5℃或37℃,6h。如果在冷凍或腌制品中三種菌都測(cè),則是在37℃孵育。如果只測(cè)創(chuàng)傷弧菌(不論食品類型),也是37℃孵育。如果在新鮮食品中只檢測(cè)副溶血性弧菌或霍亂弧菌,則增菌溫度為41.5℃。

 

ISO還推薦了二次增菌,也是用ASPW,原則同上。分離菌則推薦同時(shí)采用TCBS和另一種選擇性固體培養(yǎng)基。對(duì)于陽性菌落,驗(yàn)證可采用生化試驗(yàn)或PCR、qPCR。生化試驗(yàn)包括賴氨酸脫羧、精氨酸二氫化酶試驗(yàn),-半乳糖苷酶試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)等。

 

世界微生物產(chǎn)品供應(yīng)商HiMedia公司開發(fā)的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào)MV1682),可同時(shí)分離鑒別副溶血性弧菌和霍亂弧菌。該顯色培養(yǎng)基為高(堿性)pH,有助于選擇性分離弧菌屬。它根據(jù)細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物反應(yīng)的原理,霍亂弧菌菌落呈紫色,副溶血性弧菌菌落呈藍(lán)綠色(見下圖)。

 

該弧菌分離培養(yǎng)基用植物蛋白胨取代動(dòng)物蛋白胨,更加環(huán)保,也避免了瘋牛病風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)*同類進(jìn)口產(chǎn)品。對(duì)于陽性菌落,還可進(jìn)一步用HiMedia公司生產(chǎn)的弧菌生化鑒定條(貨號(hào)KB007)來鑒定。該鑒定條包含了12種傳統(tǒng)的生化試驗(yàn),包括伏普試驗(yàn)、精氨酸脫羧試驗(yàn)、鹽耐量試驗(yàn)(1%)、ONPG試驗(yàn)

、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、鳥氨酸脫羧試驗(yàn)、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)等,操作方便,結(jié)果準(zhǔn)確,可鑒定28種弧菌,具體如下:

 

河口弧菌(V. aestuarianus)

溶藻弧菌(V. alginolyticus)

坎氏弧菌(V. campbellii)

鯊魚弧菌(V. carchariae)

霍亂弧菌(V. cholerae)

辛辛那提弧菌(V. cincinnatiensis)

雙氮養(yǎng)弧菌(V. diazotrophicus)

費(fèi)氏弧菌(V. fischeri)

河流弧菌(V. fluvialis)

弗尼斯弧菌(V. furnissii)

產(chǎn)氣弧菌(V. gazogenes)

哈維氏弧菌(V. harveyi)

霍氏弧菌(V. hollisae)

火神弧菌(V. logei)

地中海弧菌(V. mediterranei)

麥?zhǔn)匣【╒. metschnikovii)

擬態(tài)弧菌(V. mimicus)

飄浮弧菌(V. natriegens)

沙蠶弧菌(V. nereis)

黑美人弧菌(V. nigripulchritudo)

病海魚弧菌(V. ordalii)

東方弧菌(V. orientalis)

副溶血性弧菌(V. parahaemolyticus)

解蛋白弧菌(V. proteolyticus)

殺鮭弧菌(V. salmonicida)

燦爛弧菌(V. splendidus)

塔氏弧菌(V. tubiashii)

創(chuàng)傷弧菌(V. vulnificus)

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測(cè)領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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