根據(jù)我國的食品安全標準,對嬰兒配方食品需測定葉酸含量,以保證在正常范圍。具體測定以微生物培養(yǎng)法為選擇。小編現(xiàn)將具體過程拆解如下,以資感興趣人士參考。
所需儀器有天平、培養(yǎng)箱、離心機(需能放置試管)、超聲波振蕩器、pH計、分光光度計、渦旋振蕩器等。所需培養(yǎng)基有維持培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基和測定培養(yǎng)基,可購買商品化產品(建議進口產品,以保證質量),以節(jié)省人力和時間。培養(yǎng)基干粉需按產品說明制備和滅菌,放置在10℃以下密閉容器中保存。
樣本制備,可直接稱量0.1至0.5g,至小數(shù)點后三位,轉入100ml錐形瓶中。用80ml氫氧化鈉乙醇溶液溶解,超聲震蕩2-4小時,加水定容。對樣本液進行適當稀釋,使樣本葉酸含量在0.2ng/ml~0.6ng/ml中。
再取3支試管(所用試管需嚴格鹽酸浸泡和高溫烘干消毒),分別加入0.5、1.0、2.0ml稀釋后的樣本,補水至5ml。再加入5ml葉酸測定用培養(yǎng)液,混勻。
制備葉酸標準溶液。先制備儲存液(20μg/ml),即稱取20mg標準品,用氫氧化鈉溶液在1000ml容量瓶中溶解定容,再用分光光度法進行濃度標定。儲存液可在棕色瓶中4℃儲存2年。用儲存液可配置中間液(0.2μg/ml)和工作液(0.2ng/ml)。再配濃度梯度工作液,使葉酸量從0ng, 0.05ng, 0.1ng,0.2ng遞增至1ng(先補水5ml,再加5ml葉酸測定用培養(yǎng)液)。再高壓滅菌15分鐘。
測定時,向每支測定管加入20μl接種液,塞好棉塞,37℃培養(yǎng)20-40小時,直至獲得zui大渾濁度。
那么,接種菌液如何制備,zui后如何用分光光度計檢測和分析結果呢?小編下次為您拆解。
葉酸干酪培養(yǎng)基(即葉酸測定培養(yǎng)液)可向北京締一生物購買,該產品為培養(yǎng)基生產商HiMedia公司生產。其工藝及產品質量均通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP、CE和FDA認證,質量可靠,性能,產品行銷140多個國家。
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